A fosfatase alcalina (ALP) é uma enzima naturalmente presente em todos os tipos de leite cru. A enzima catalisa a desfosforilação de diferentes tipos de proteínas e nucleotídeos. Uma vez que o calor é necessário para inativar a enzima a fosfatase alcalina serve como um indicador poderoso de que a pasteurização foi bem-sucedida (quando combinada com o rápido resfriamento). Na verdade, a inativação dessa enzima em um nível aceitável é usada para medir a eficácia da pasteurização. Esse valor varia entre diferentes tipos de leite pasteurizado: < 350 mU (miliunidades)/l para leite de vaca (ISO 11816-1), < 300 mU/l para leite de cabra e < 500 mU/l para leite de ovelha.
Medições de ALP acima desses níveis seriam consideradas indicativas de um problema significativo no processo de pasteurização ou de contaminação após a pasteurização. Por ser mais estável no calor do que a maioria dos organismos patogênicos, a ALP pode servir como um indicador da segurança geral do produto, embora não possa garantir que o produto testado esteja completamente livre de microrganismos indesejáveis.
Os avanços nas últimas décadas permitiram o desenvolvimento de procedimentos mais robustos para detectar a ALP em produtos lácteos pasteurizados. Em geral, esses testes contêm um substrato com um grupo de fosfato. Após a clivagem pela ALP, o substrato é convertido em um composto fluorescente ou gerador de luz. Então, o nível de fluorescência ou luz é lido pelo instrumento do sistema, exibindo valores proporcionais à atividade da ALP na amostra. Esses sistemas são muito mais rápidos, práticos e sensíveis do que os antigos métodos colorimétricos e permitem detectar níveis muito mais baixos de ALP.
O ZymoSnap ALP da Hygiena® é um teste robusto. É um método rápido e bioluminogênico que determina o nível de atividade da enzima ALP em 5 minutos utilizando um procedimento simples de três passos. O teste utiliza um único dispositivo autocontido em um procedimento simples. Uma amostra é adicionada ao tubo do ZymoSnap ALP, o dispositivo é ativado para liberar o reagente de detecção e é incubado por 5 minutos. O resultado da atividade enzimática de ALP é medida em um luminômetro, especificamente, o EnSURE® Touch.
O EnSURE Touch converte as unidades relativas de luz (RLU) para miliunidades por litro (mU/l) de ALP na amostra de leite pasteurizado. Geralmente, valores abaixo de 100 mU/l indicam um resultado aprovado, valores acima de 350 mU/l indicam reprovação, enquanto os resultados intermediários mostram um resultado que requer cautela. Esses limites estão alinhados com as regulamentações dos níveis de ALP após a pasteurização. Para estabelecer seus próprios critérios de aprovação e reprovação, um controle positivo e negativo deve ser preparado usando o kit de controle positivo do ZymoSnap ALP e testado antes de testar qualquer amostra desconhecida. Atualmente, o ZymoSnap já foi aprovado pela AOAC e aguarda aprovação do NCIMS.
Como benefício adicional, o luminômetro EnSURE Touch apoia outros testes para monitoramento de higiene e alérgenicos, todos com aplicações em operações de fabricação de laticínios, fornecendo um sistema de custo eficiente para qualquer instalação de laticínios. Além disso, o instrumento é autocalibrável, requerendo pouca ou nenhuma manutenção e reduzindo ainda mais os custos. Os dados ainda podem ser armazenados no software de análise de dados SureTrend® Cloud (SaaS) da Hygiena para rastrear, analisar e gerar relatórios de testes automaticamente, mantendo os registros para auditorias.
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