Resultados falso-positivos em testes para detecção de resíduos de antibióticos

A presença de resíduos de antibióticos é uma constante preocupação de toda a cadeia de produção de alimentos, com particular destaque ao leite. Busca-se atualmente, o fornecimento de alimentos sem o risco da presença de resíduos, cujo conjunto de medidas para este objetivo deve ser iniciado na fazenda leiteira, respeitando-se o período de carência dos medicamentos utilizados, como por exemplo, no tratamento de casos de mastite.

Entre os diversos testes disponíveis no mercado para a detecção rápida de resíduos de antibióticos, o Delvotest baseia-se na inibição do crescimento de um microrganismo padrão (Bacillus stearothermophilus var. calidolactis). Alguns estudos científicos comprovaram que podem ocorrer resultados falso-positivos (resultado indicar positivo, quanto na verdade não há resíduos de antibióticos no leite) utilizando-se o Delvotest, principalmente em amostras individuais de leite e daquelas provenientes de vacas com mastite ou colostro. Como exemplo, um estudo apontou que cerca de 37,7% de amostras de leite de vacas apresentando mastite clínica obtiveram resultados falso-positivos. Deve-se esclarecer, entretanto, que em amostras de leite de tanque a ocorrência de falso-positivos é bastante baixa.

Entre as razões para a ocorrência de falso-positivos são apontados os altos níveis de inibidores naturais do leite de vacas com mastite e do colostro, cuja ação é inibir o crescimento de microrganismos e desta forma, interferem no desempenho do Delvotest e outros testes baseados em crescimento de microrganismos. São relacionados como inibidores naturais: a lactoferrina e lisozima. Além destes inibidores encontrados naturalmente no leite, o tempo de incubação das amostras do Delvotest influencia os resultados, sendo que tempos de incubação de 2,5 horas resultam em maior ocorrência de falso-positivos que em 3 horas.

Pode-se considerar que após o término do período de carência de um antibiótico o leite esteja apropriado para o consumo humano. No entanto, em algumas situações, os testes de detecção rápida podem indicar resultados positivos. Neste caso, é fundamental determinar se estes resultados positivos ocorrem pela real presença de resíduos de antibióticos ou se são falso-positivos.

Para responder a esta questão, foi desenvolvida uma pesquisa no Japão, onde foram estudados 73 casos de tratamento intramamário contra a mastite, nos quais foram utilizados principalmente os antibióticos do grupo dos beta-lactâmicos (penicilinas e cefalosporinas).

Após o tratamento e o término do período de carência, foram coletadas amostras de leite para detecção de resíduos de antibióticos com o uso do Delvotest e confirmação com o uso de outros dois testes. Após a realização do Delvotest, as amostras de leite cru foram aquecidas a 82ºC por 5 minutos, com o objetivo de eliminar a ação de substancias inibidoras presentes no leite.

No estudo em questão, das 73 amostras analisadas foram identificadas 24 que apresentaram resultados positivos para resíduos de antibióticos no leite cru. Após o tratamento térmico destas amostras positivas (82ºC por 5 minutos) apenas 3 delas permaneceram com resultados positivos, os quais foram confirmados como sendo devido a real presença de resíduo de antibiótico pelos outros dois testes utilizados.

Adicionalmente, a CCS do leite nos quartos curados após o tratamento foi reduzida, mas naqueles em que não houve a cura a CCS permaneceu elevada e contribui para a ocorrência de resultados falso-positivos, devido a presença de altos níveis de inibidores naturais.

Os resultados deste estudo indicam que o tratamento térmico de amostras de leite para inativar os inibidores naturais, antes da realização do Delvotest, é uma excelente estratégia para reduzir a ocorrência de falso-positivos. Pode-se adotar dois tipos de procedimentos: tratar termicamente conforme descrito (82ºC por 5 minutos) ou tratar termicamente apenas as amostras positivas, para maior confiança dos resultados obtidos.

Em termos práticos, a estratégias de submeter ao tratamento térmico todas as amostras a serem testadas traz a vantagem de ser mais rápida e com menor custo do uso de kits, enquanto que o procedimento de somente aquecer as amostras com resultados positivos no leite cru é mais demorada cara, pois aumenta o gasto com o teste.

Fonte: Journal of Dairy Science, 88:908-913, 2005, adaptado por Equipe MilkPoint